微生物取样方式大全

随着高通量技术的发展，我们对质生器物的重新认识逐步了解，质生器物在诊断以及科学研究上的运用越来越多，而质生器物调制的正确与否直接正因如此质生器物数据的准确性。

因此，质生器物的调制方具体法则就显得极不极为重要。

首先，我们需要在量化的过程中会，引意请肯定几个方面：

(1) 所有物理用动一手的量化用具能够是经过冷藏的（如探头袋、量化器、采血管、引射器、鞭子、锯、刀类工具等）。

(2) 抽取探头文档，量化以前或量化后应以在军装探头的器皿或探头袋上立即贴上标签，每件探头能够标有雍正年间楚（例如品名、比如说、数量、量化地点、量化人及量化年份等）。

(3) 恳请尽量将抽样抽 3-5 份备份；决定每组取用 6 个及以上重复使用十分合适，将近 3 个重复使用。

(4) 用动一手谷来由量化管的物理探头，可以甲醛运输；如果不用量化管，则能够室温-80℃存留，存留期间切忌连续不断熟融；室温邮寄时恳请将探头放置挤出有箱中会，用泥浆邮寄。

然而探头品种繁多，各有不同的探头量化有各有不同的方案，比如说详细介绍每类探头相异以的量化方案。

生态环境质生器物

除此以外秦人层

(1)去除内层浮秦人、凋落器物等，根据秦人层前里斯，选择是否过2mm筛网，每个探头从3个及以上调制点抽取并混杂而成，决定将抽样抽 3-5 份备份；

引：调制时需引意每个调制点的取用秦人浅层及调制量应以微小保持一致，秦人样上层与下层的百分比要相同。

(2)存留于未成熟离心气管会，放置挤出有箱（冰袋或泥浆）中会，0°C请肯定带回的物理室；

(3)如果条件不允许立即里斯DNA，可将探头放置-80°C冰箱中会存留，并通过泥浆邮寄至公司后里斯量化品总 DNA。

根际秦人层

根际，是指受真菌根系活动制约，在器物理、化学和生器物学性质上各有不同于秦人体的那部分质域生态环境。部分学术研究是针对秦人层质生器物与真菌密切关系的相互关系，因此需要对根际秦人顺利进行量化。

(1) 抽取植株，去除根周较松散的秦人，仍附着在根系内层的视为根际秦人。将真菌放置装配冰袋或泥浆的保温箱中会，避光条件，0℃请肯定带回的物理室；

(2)将要未成熟器皿，将真菌根系部分放置缓冲引射器（PBS或生理盐水）中会振动，振动短时间和强度依据抽样实际前里斯调整，洗下根际秦人；

(3)将净化引射器顺利进行高速离心，抽取秦人层盐类，若盐类较少，也可管控过程鞘，同一样方量化的抽样顺利进行的单而会混杂；

(4) 将抽样抽至离心气管会，密封，标有抽样文档后引射器氮速熟，放置-80℃冰箱存留，泥浆邮寄。

地表水沉积、底泥

抽取水底沉积5~10 g（具体浅层依据物理旨在确定），存留于熟存气管会，标有好抽样文档后引射器氮速熟或放置装配泥浆的挤出有盒中会，守护者生态环境下，要求带回的物理室，-80℃冰箱存留，泥浆邮寄。

污泥

的单量化并而会微小混杂至近10 ml的碎屑污泥抽样（5~10 g沉降器物），存留至熟存气管会，标有好抽样文档后引射器氮速熟或放置装配泥浆的挤出有盒中会，守护者生态环境下，要求带回的物理室，-80℃冰箱存留，泥浆邮寄。

地表水

(1) 抽取排泄物应以引意未成熟操作，以防止杂菌混入。

(2) 根据物理增设，选取用须要镜片的滤鞘，最简单地表水抽滤机抽滤 1~100 L 地表水（各有不同水质间差异大大），或抽滤至滤鞘上可见明显覆盖器物。

对于透明地表水，决定管控过程以前搅动分离碎屑颗粒器物，还用大镜片滤鞘管控过程一遍，再次用小镜片滤鞘管控过程。

(3) 标有好抽样文档后引射器氮速熟或放置装配泥浆的挤出有盒中会，守护者生态环境下，要求带回的物理室，-80℃冰箱存留，泥浆邮寄。

引：根据地表水中会质生器物含铁各有不同，量化量有所各有不同：用水等微生物充沛的地表水用量一般为200-1000 ml，水体、河流等自然地表水一般为 1-2 L，通水等微生物含铁较低的地表水则一般为 1-5 L，海洋地表水随着地理位置、季节和量化浅层浮动更大。

的食品

包装的食品

尽似乎取用原包装，检验以前免得开封，以防污染。

大块再生的食品，应以从几个各有不同指甲用冷藏工具量化，使探头具有确实的代表性；

在将探头送出有的物理室以前，要始终保持探头处于再生全然。探头一旦凝固，不可再次熟，保持加热均可。

引射器体的食品

通常前里斯下，引射器体的食品较容易拿到代表性探头。

玫瑰花在大罐中会的引射器体的食品（如果汁、奶昔、饮品等），量化时可连续或间歇面团；

玫瑰花在小器皿的引射器体的食品，可在量化以前将引射器体上移，使其全然混匀。更大的探头要放在已冷藏的器皿中会送往的物理室。的物理室在量化样品之以前应以将引射器体再次不可不必要混匀一次。

对于果汁、橄榄油、真菌油等，常采行虹吸具体法则（或用长形吸管）按各有不同浅层低层量化，并混匀。如探头粘稠或含有混合物碎屑器物或不微小引射器体应以确实搅匀后，均须量化。

半混合物的食品

用未成熟操作开启包装，此类探头只能用吸管吸取用，最简单未成熟勺子从各有不同指甲挖量化品，抽出有未成熟盛样器皿。若探头是常温下，应以边取用边混杂。

混合物的食品

面粉或等易于混匀的的食品，其浓缩质量微小、稳定，可以抽取用小探头（如100g）样品。但散装探头能够从多个点取用大样，且每个探头都要单独管控，在样品以前要不可不必要混匀，并从中会取用一份探头顺利进行样品。

肉类、鱼类或值得肯定的的食品既要在表皮量化又要在深层量化。深层量化时要用力免得被内层污染，同时不必要使之暴露在空气当中会。

有些的食品，如鲜肉或熟肉最简单冷藏的解剖刀和夹住量化；再生的食品可在未某种原因的全然下最简单剪刀、香钻或人口为129人（一般以前段钻入）等受益用深层探头；全蛋粉等常温下状探头量化时，最简单冷藏的量化器以前段弹出箱底，探头分解成量化器后里斯出有箱外，再次用冷藏小勺从上、中会、下指甲量化。

引：

· 引意免得使混合物探头过度潮湿，以防的食品中会固有的大肠杆菌滋长。

· 的食品如为非冷藏易腐的食品，应以迅速将所量化品加热至0℃~4℃；若探头是再生的，应以保持再生全然，室温邮寄。

真菌于其菌

真菌于其大肠杆菌是真菌质生态系统中会的极为重要区别于，直接对真菌的组织抽样顺利进行脱氧核糖核酸分析，可以学术研究真菌于其大肠杆菌或真菌的多样性。

(1) 根据学术研究对象选取用好吃真菌的组织（如果是真菌叶面，需去除根表微细秦人层）；0℃请肯定带回的物理室；

(2) 根据的组织大小剪成小块或；也（将近四边不超过0.5cm），在未成熟社会活动台内，用未成熟水对真菌的组织顺利进行净化30s；

(3) 内层未成熟化管控：

第一次无菌：75%无水乙醇风干1min；第二次无菌：2%次管控3min，转入75%无水乙醇风干30s，接着用未成熟水漂洗3次；

(4) 顺利进行核酸浓缩用物理或引射器氮速熟，放置-80℃冰箱存留。泥浆邮寄。

爬虫类小肠章节器物

(1) 用未成熟一手术刀挖取用（或未成熟镊子挤出有，也最简单未成熟生理盐水冲洗出有）小肠章节器物；

(2) 直接用谷来由量化盒里的亚麻签沾取用近豆类大小的小肠章节器物，将沾取用章节器物的亚麻签浸入量化管引射器体面团洗清章节器物踏入量化管存留引射器内；面团近30-40s，然后派上用场亚麻签，将圆孔门框拧好，短时间内翻滚量化管将近30秒；

(3) 通过观察到4道引射器体带有明显小肠章节器物颜色即量化出乎意料，甲醛邮寄。

人和其它爬虫类粪液

(1) 最简单以前恳请净化双一手，防止杂菌分心。将量化管取用出有，拧开门框。

(2) 用量化亚麻签沾取用少量好吃粪液(需要量为豆类一豆腐大小)；如粪液较干，可先将亚麻签在量化气管会水后沾取用；

(3) 将沾取用粪液的亚麻签浸入量化管引射器体面团洗清粪液踏入量化管存留引射器内，面团近30-40s，然后派上用场亚麻拭子，将圆孔门框拧好，短时间内翻滚量化管将近30秒；

(4) 通过观察到4道引射器体带有明显粪液颜色即量化出乎意料，甲醛邮寄。

引：

· 如3天内最简单过低剂量类、质子泵类胃药、类精神药器物恳请停药3紧接著再次样品。

· 病症、腹泻或其他症状期间不制约量化,拉稀或稀马上可以用亚麻签连续不断沾取用粪液至量化管。

· 如长期马上秘无排泄可最简单等辅助意图受益用粪液抽样。

·量化无短时间和饮茶限制,但是量化以前最难正常饮茶。

· 完成量化后抽样可甲醛有效存储一周,为保证样品追诉恳请完成量化后要求带到。

黏膜

黏膜拭子

(1) 调制以前30分钟苦行、有鉴于此酒等；

(2) 将要一杯雍正年间水（近150ml），将雍正年间水含入口中会，确实洗漱黏膜近10秒，重复使用2-3次。

(3) 将拭子伸入黏膜，使拭子头确实沾染左边黏膜内壁，上下牙床处粘鞘，用须要力度上下擦动并旋转拭子15-20圈。用或多或少方具体法则在左边黏膜内壁及上下牙床粘鞘处顺利进行另一根拭子的调制。

(4) 将拭子包涵量化管存留引射器内，面团近30-40s，然后派上用场拭子，将圆孔门框拧好，短时间内翻滚量化管将近30秒；甲醛邮寄。

舌拭子

(1) 调制以前30分钟苦行、有鉴于此酒等；

(2) 将要一杯雍正年间水（近150ml），将雍正年间水含入口中会，确实洗漱黏膜近10秒，重复使用2-3次。

(3) 将抽取对象眼睛外拉，使悬雍垂尽似乎向外牵引。同时，将拭子越过褶根到舌后壁或者悬雍垂后侧，连续不断胶带15次以上，不必要沾染褶、黏膜粘鞘和唾引射器。

(4) 将拭子包涵量化管存留引射器内，面团近30-40s，然后派上用场拭子，将圆孔门框拧好，短时间内翻滚量化管将近30秒；甲醛邮寄。

唾引射器量化

(1) 调制以前30分钟苦行、有鉴于此酒等；

(2) 将要一杯雍正年间水（近150ml），将雍正年间水含入口中会，确实洗漱黏膜近10秒，重复使用2-3次。

(3) 用褶尖抵住上颚或下颚齿根以硫化物唾引射器，向量化气管会轻轻吐入唾引射器，年中引射器体唾引射器（非悬浮）达到2ml 以上。面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒；甲醛邮寄。

牙菌斑量化

(1) 调制以前30分钟苦行、有鉴于此酒等；

(2) 将要一杯雍正年间水（近150ml），将雍正年间水含入口中会，确实洗漱黏膜近10秒，重复使用2-3次。

(3) 用亚麻卷隔湿所抽取的牙齿，再次以未成熟生理盐水冲洗牙面，用未成熟挖锯或探针抽取窝沟菌斑或唇颊面菌斑；以牙线放置两邻牙密切关系，紧贴牙面抽取邻面菌斑。抽取后抽出有含有存留引射器的量化4道，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒；甲醛邮寄。

脸部

一、抽样审核

如果受试者存在请肯定前里斯，则需剔除：

(1) 调制以前7天，贴部，头皮，一手脚，胳膊，以前臂或者一手最简单过低剂量或者内生器物质者；

(2) 贴部，胸部，背部或者膝盖有病症者；

(3) 头皮，贴，一手脚，一手臂，以前臂或者一手上有水泡，脓疱，疮，溃疡，腐烂或者溃疡者；

(4) 在量化指甲处有中心地带水泡，脓疱，疮，溃疡，腐烂，溃疡，藓，伤口，金属内层或者色素及粉橙色的脸部修复区者；

(5) 身上有一处粉色或橙色脸部区域者（暗指或者湿疹病症）；

(6) 一手掌或者前肢脸部增厚或者有金属内层者；

(7) 两周之内，每天最简单去屑洗发水都不可雍正年间理干净头皮屑者；

(8) 四肢中心地带或者一处有散发型皮疹者。

二、抽取方具体法则

(1) 将拭子在未成熟生理盐水或雍正年间水中会水，在物理旨在区域胶带10s；

(2) 抽样抽取后立即将拭子包涵量化管存留引射器内，面团近30-40s，然后派上用场拭子，将圆孔门框拧好，短时间内翻滚量化管将近30秒；甲醛邮寄。

人体其它指甲

的组织

(1) 取用其所指甲的组织探头，于未成熟操作大屏幕解剖，用冷藏剪刀、解剖刀切取用指甲盖大小左右的组织块；

(2) 将的组织块抽出有熟存气管会并盖紧门框，标有好抽样文档。探头引射器氮速熟后抽出有-80℃冰箱存留。泥浆邮寄。

肺泡田间洗引射器

(1) 口舌部顺利进行雾化利多卡因后，滴引120-300mL未成熟生理盐水顺利进行BAL引射器体骨骸的抽取。量化后离心，去掉上雍正年间，取用硫化器物。

(2) 用引射器氮速熟-80℃存留，泥浆邮寄；或取用硫化器物洗清置量化管，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

小肠田间洗引射器

(1) 抽取小肠田间洗引射器，过鞘；或者将小肠田间洗引射器离心，弃上雍正年间，取用硫化器物。

(2) 用引射器氮速熟-80℃存留，泥浆邮寄；或取用硫化器物洗清置量化管，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

生殖道

(1) 采行未成熟亚麻拭子，沿着口、中会部和后白塔内腔壁旋转拭子动一手加速度数次。

(2) 胶带后立即将拭子浸入量化气管会的存留引射器中会，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

血引射器

(1) 10-20ml（幼儿1-3ml）全血抽取到真空抽取管（已加入抗凝剂），上移两次。

(2) 标有文档，室温存留，泥浆邮寄。

奶

(1) 净化双一手，母乳期用未成熟水胶带，取用奶5-10ml 3管（杀掉第一管）。

(2) 室温（-20℃）存留，泥浆邮寄；或者用拭子沾取用奶后，立即将拭子浸入量化气管会的存留引射器中会，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

血栓

(1) 抽取血栓10-20ml，离心，弃上雍正年间，取用硫化器物。

(2) 用引射器氮速熟-80℃存留，泥浆邮寄；或取用硫化器物洗清置我们的量化管，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

胃

(1) 胃抽样由十二指肠竖井具体法则或大肠穿刺具体法则或一手术中会留取用胃，抽取胃量为5ml，置未成熟4道，离心，弃上雍正年间，取用硫化器物。

(2) 用引射器氮速熟-80℃存留，泥浆邮寄；或取用硫化器物洗清置我们的量化管，面团近30-40s，短时间内翻滚量化管将近30秒，甲醛邮寄。

粪引射器

(1) 抽取中会段粪引射器40 ml左右。（中会段粪：在排粪过程中会，弃去以前、后时段排出有的粪引射器，以未成熟器皿抽取）；

(2) 一般留取用雍正年间晨第一次粪引射器，最难6小时。中风病症可以直接取用，病症将的中会段粪抽取至未成熟杯中会40 ml为宜；门诊病症或健康人等无粪意者，可以适量饮水，在有粪意时尽似乎的多憋一段短时间，将粪引射器的中会段粪抽取至未成熟粪杯中会40 ml为宜；

(3) 离心，去上雍正年间，加入我们的引射器体存留，甲醛邮寄。

引：

· 应以在低剂量最简单以前或停用低剂量药5紧接著留粪引射器骨骸。

· 对于小马上轻度失禁病症或者短时间太长病症，对中会段粪比较难控制的前里斯下，我们可以告诉病症在排粪过程中会3 s后抽取粪引射器。

·如果是卧病在床或苏醒病人，可由相关医务人员用导粪方具体法则抽取粪引射器，此都从中会要严格执行未成熟操作，不必要因导粪不慎而导致的泌粪系统感染。也可以采行经下腹以前壁膀胱穿刺取用粪培养的方具体法则。

以上是各类探头的量化方具体法则，可供参考。

也许有人问，是否一定要用我们的量化管存留引射器，能不最简单生理盐水或者别的来替代。比如说是我们顺利进行的关于存留引射器的测试者：

经测试者，最简单谷来由量化管存留引射器，能在-80℃ ~ 65℃ 的条件下保持DNA正确性，室温有效储存长达30天，尽似乎保证与好吃抽样具有保持一致的微生物构成特征。

要不甘心十分理想的脱氧核糖核酸结果，首先探头的质量需要得到保障，当然抽样浓缩用、建库、分析对最终结果都会产生一定的制约，而量化或多或少极为重要。如果没有取用好，后续分析再次多，似乎也得不到想要的结果。

另外，繁复的学术研究设计对于拿到准确且有内涵的结果也很极为重要，学术研究设计中会应以引意考虑混杂心理因素，如果在不确定的前里斯下，也可以须要讨论我们的他的团队，转化我们的经验，给您合适的决定。

当然物理过程中会，也似乎会受到多种心理因素的制约，我们会采行阴性和特征性相符合，尽似乎减少这些不必要的制约。

总之，动一手好以中期的将要社会活动，包括学术研究设计，量化等，后续的浓缩用、脱氧核糖核酸、分析交给我们~

注解

[1] Edwards J , Johnson C , Christian Santos-Medellín, et al. Structure, variation, and assembly of the root-associated microbiomes of rice[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2015, 112(8).

[2] Bulgarelli D, Rott M, Schlaeppi K, et al. Revealing structure and assembly cues for Arabidopsis root-inhabiting bacterial microbiota[J]. Nature, 2013, 501(7468): S25.

[3] ISO 10381-6: 2009 Soil quality - Sampling - Part 6: Guidance on the collection, handling and storage of soil under aerobic conditions for the assessment of microbiological processes, biomass and diversity in the laboratory.

[4] Ruiz-González C, Niño-García J P, Kembel S W, et al. Identifying the core seed bank of a complex boreal bacterial metacommunity[J]. The ISME journal, 2017, 11(9): 2012.

[5] Wang Y, Ma L, Mao Y, et al. Comammox in drinking water systems[J]. Water research, 2017, 116: 332-341.

[6] Chow C E T, Winget D M, White III R A, et al. Combining genomic sequencing methods to explore viral diversity and reveal potential virus-host interactions[J]. Frontiers in microbiology, 2015, 6: 265.

[7] Yang Y, Li B, Zou S, et al. Fate of antibiotic resistance genes in sewage treatment plant revealed by metagenomic approach[J]. Water research, 2014, 62: 97-106.

[8] Pesant S, Not F, Picheral M, et al. Open science resources for the discovery and ysis of Tara Oceans data[J]. Scientific data, 2015, 2.

[9] Ma J, Wang Z, Li H, et al. Metagenomes reveal microbial structures, functional potentials, and biofouling-related genes in a membrane bioreactor[J]. Applied microbiology and biotechnology, 2016, 100(11): 5109-5121.

[10] Liu J, Yang H, Zhao M, et al. Spatial distribution patterns of benthic microbial communities along the Pearl Estuary, China[J]. Systematic and applied microbiology, 2014, 37(8): 578-589.

[11] Mason O U, Scott N M, Gonzalez A, et al. Metagenomics reveals sediment microbial community response to Deepwater Horizon oil spill[J]. The ISME journal, 2014, 8(7): 1464.

[12] Bråte J, Logares R, Berney C, et al. Freshwater Perkinsea and marine-freshwater colonizations revealed by pyrosequencing and phylogeny of environmental rDNA[J]. The ISME journal, 2010, 4(9): 1144.

[13] Li J, Sung C Y J, Lee N, et al. Probiotics modulated gut microbiota suppresses hepatocellular carcinoma growth in mice[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016, 113(9): E1306-E1315.

[14] Gebhart D, Lok S, Clare S, et al. A modified R-type bacteriocin specifically targeting Clostridium difficile prevents colonization of mice without affecting gut microbiota diversity[J]. MBio, 2015, 6(2): e02368-14.

[15] Hänninen A, Toivonen R, Pöysti S, et al. Akkermansia muciniphila induces gut microbiota remodelling and controls islet autoimmunity in NOD mice[J]. Gut, 2018, 67(8): 1445-1453.

[16] Fujisaka S, Avila-Pacheco J, Soto M, et al. Diet, genetics, and the gut microbiome drive dynamic changes in plasma metabolites[J]. Cell reports, 2018, 22(11): 3072-3086.

[17] Agus A, Denizot J, Thévenot J, et al. Western diet induces a shift in microbiota composition enhancing susceptibility to Adherent-Invasive E. coli infection and intestinal inflammation[J]. Scientific reports, 2016, 6: 19032.

[18] Stanley D, Moore R J, Wong C H Y. An insight into intestinal mucosal microbiota disruption after stroke[J]. Scientific reports, 2018, 8(1): 568.

[19] Rabbi M F, Munyaka P M, Eissa N, et al. Human catestatin alters gut microbiota composition in mice[J]. Frontiers in microbiology, 2017, 7: 2151.

[20] Rabbi M F, Eissa N, Munyaka P M, et al. Reactivation of intestinal inflammation is suppressed by catestatin in a murine model of colitis via M1 macrophages and not the gut microbiota[J]. Frontiers in immunology, 2017, 8: 985.

[21] McInnes P, Cutting M. Manual of procedures for human microbiome project: Core microbiome sampling, protocol A, HMP protocol no. 07-001, version 11. 2010[J]. Current version: _MOP_Version12_0_072910.pdf

[22] Jie Z, Xia H, Zhong S L, et al. The gut microbiome in atherosclerotic cardiovascular disease [J]. Nature communications, 2017, 8(1): 845.

[23] Mar J S, LaMere B J, Lin D L, et al. Disease Severity and Immune Activity Relate to Distinct Interkingdom Gut Microbiome States in Ethnically Distinct Ulcerative Colitis Patients [J]. mBio, 2016, 7(4).

[24] Sze M A, Baxter N T, Ruffin M T t, et al. Normalization of the microbiota in patients after treatment for colonic lesions [J]. Microbiome, 2017, 5(1): 150.

[25] Flemer B, Lynch D B, Brown J M, et al. Tumour-associated and non-tumour-associated microbiota in colorectal cancer [J]. Gut, 2017, 66(4): 633-43.